Propiedades bioquímicas de las bacterias

Pruebas bioquímicas:

Como funciona químicamente el organismo, nos da a conocer hasta la genética.
Nos da información acerca de las propiedades fisiológicas (funciones) de estos microorganismos.
Si son aerobios, anaerobios, identificar el ADN o situaciones de mutación.

Enzimas:

Son proteínas o factores que intervienen en un proceso (catalizador).
Estas hacen que una reacción se realice rápidamente o lentamente; y pueden ser hidrolíticas

Endoenzimas:

Enzimas intracelulares que llevan a cabo ciertas reacciones (dentro de la célula)

Exoenzimas:

Funcionan afuera de la célula, tienen cierta interacción con la pared celular (se produce una excreción por ellas)
Pueden ser hidrolizantes, amiloliticas, etc.
Y un ejemplo de proceso en que trabajan puede ser: Hidrólisis del almidón.

Las propiedades químicas de las bacterias se llevan mas que nada en la fisiología. Que comprende procesos como la fotosíntesis, quimiosíntesis, nutrición y ciclos.
Y obviamente esto nos lleva a dar un diagnostico que pueden dar a la toma de decisiones.

Enzimas microbacterianas

• Hidrolizantes:

Amilolíticas: Sacaroliicas o fermentativas

Protolíticas: Proteeasas, Paseasas, Gelatinasas.

Lipoliticas: Lipasas

• Reductoras y Oxidante:

Productasa y Oxidasa

• Coagulantes:  

Coagulasa

• Citolíticas:

Hemolisina y leucocidinas

Interpretación de Antibiograma

Interpretación estándar:

•             Diámetro >  18mm o radio > 6mm (sensible)
  ·         Diámetro < 18 mm o radio < 6mm (resistente)
  ·         Lo anterior considera discos de 6 mm
  ·         Los puntos de corte varían específicamente para algún microorganismo y/o antibióticos
  ·         La interpretación debe basarse en los estándares vigentes del CLSE
  ·         El punto de arte intermedio se interpreta en MICs

Antibiótico	Concentrado en disco	Resistente	Intermedio	Sensible
Amikacina	30	< 14	15 – 16	Ø  17
Ampicilina	10	< 13	14 – 16	Ø  17
Cefazolina	30	<14	15 – 17	Ø  18
Gentamicina	10	< 12	13 – 14	Ø  15
Tetracyclina	30	< 14	15 – 18	Ø  19
Ticarcilina	75	< 14	15 – 19	Ø  20
Trimeetropin	5	< 10	11 – 15	Ø  16
Tobramicina	10	< 12	13 – 14	Ø  15

Caldo de Urea.

Este medio de cultivo fue expuesto por el equipo 6, a continuación un pequeño resumen de lo expuesto:

Este medio es muy utilizado y se emplea para la diferenciación de bacterias por medio de la utilización de la urea como única fuente de carbono.

¿Cúal es la función de la ureasa?

La enzima ureasa hidroliza la urea en amoníaco y anhídrido carbónico, ante la variación de pH por la alcalinización, el indicador rojo de fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado.

Se utiliza solamente para la detección de la actividad de la ureasa en especies del género Proteus que dan la prueba positiva después de una incubación de 8 h. Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes de que la bacteria muestre un crecimiento aceptable no podrá determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar la urea. Si un microorganismo es capaz de hidrolizar la urea, pero no de utilizar el amoníaco como fuente de nitrógeno, no se produce crecimiento y es posible observar un resultado falso negativo. 

NOTA: No se recomienda para las bacterias con reacción de ureasa retardada. 

Sembrar el medio de cultivo con el cultivo puro de ensayo. Incubar 24 – 48 h a 35ºC.  En ocasiones hasta 72 horas.

Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo de fenol. 

Las bacterias que producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio y el indicador se vuelve rojo púrpura. Observe en la tabla de reacciones bioquímicas que solo el género Proteus da esta reacción positiva

Características:
 

1.    Utilización de urea como fuente de carbono.

2.     La enzima ureasa hidroliza la urea en amoniaco y anhídrido carbónico, ante la variación del pH          por la alcalinización el indicador Rojo Fenol, vira de amarillo claro a ligeramente rosado

3.    Se utiliza solamente para la detección de la ureasa en especies del género Proteus.

4.    Si los nutrientes suministrados por el extracto de levadura se consumen antes que la bacteria                muestre crecimiento no podrá determinarse con exactitud su capacidad de hidrolizar urea.

5.    Pero si es capaz de hidrolizar la urea, pero no utilizar el amoniaco como fuente de nitrógeno, no          se produce crecimiento y puede dar un falso negativo.

Agar Hierro de Kligler

Utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la fermentación de lactosa y glucosa, formando ácido sulfhídrico.

Se solidifica de forma inclinada permitiendo 2 cámaras:

·         Aerobica: Pico de flauta

·         Anaerobica: Fondo del tubo

Con esto se permite una movilidad es decir, la ruptura del medio. 

Su indicador es el rojo fenol.

Un pH de 7.3 + 0.2

• La fermentación de glucosa cambia el medio amarillo, pero este se concentra en el fondo de, tubo.
• La fermentación de la lactosa  cambia el medio amarillo y dado que su concentración es mayor, la formación es suficiente para mantener el color amarillo tanto en el fondo como en el pico.

Por ejemplo: Si el pico del tubo es rojo y el fondo es amarillo y no existe movilidad se dice que HUBO FERMENTACION DE GLUCOSA

Los tipos de reacciones producidas por las bacterias pueden ser las siguientes:

1. Sin fermentación de carbohidratos
2. Fermentación de glucosa
3. Fermentación de lactosa

MICROORGANISMO	SUPERFICIE	PRODUCCIÓN DE GAS	PRODUCCIÓN DE H2S
E. Coli	A/A	+	-
Klebsiella Pneumonae	A/A	+	-
Proteus Mirabilis	K/A	-	+
Salmonella Typhimurium	K/A	-	´+
Shigella Flexneri	K/A	-	-
Pseeudomonas Aeroginasa	K/K	-	-

Donde A significa reacción Ácida (amarillo y K reacción alcalina (rojo)

Formación de Gas:

Se observa la formación de burbujas, fractura o desplazamiento del agar.

La producción de Sulfuro d Hidrógeno se debe al tiosulfato de sodio 

El sulfuro de fierro reacciona con el citrato férrico de amonio formando sulfuro de hierro que se observa en un precipitado negro

Los resultados deben ser leídos luego de 18 – 24 hrs. de incubación, porque después de este tiempo se puede obtener falsos positivos por el consumo de peptonas.

Si la generación de ácido sulfúrico es mayor puede llevar el ennegrecimiento del tubo 

Prueba de ELISA

Antes de explicar en qué consiste esta prueba, primero que nada me gustaría  decirles por qué se le llama o por qué le pusieron ELISA

ELISA es el acrónimo en inglés para Enzimoinmuno Análisis de Adsorción.
Es en realidad un examen de laboratorio usado para detectar anticuerpos en la sangre.

El modo de realización de esta famosa prueba es el siguiente:

La sangre se extrae típicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del dorso de la mano, y posteriormente la muestra se envía a un laboratorio donde se vincula el anticuerpo o antígeno objeto de estudio a una enzima. Si la sustancia a estudiar está presente en la muestra, la solución de la prueba se torna de un color diferente.

Toda esta serie de pruebas sanguíneas son utilizadas para diagnosticar la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) de tipo crónica.

 NOTA: Las personas con infección temprana por VIH (llamada infección aguda o infección primaria por VIH) a menudo tienen un resultado negativo en el examen.

Las pruebas negativas no descartan la infección por VIH. Existe un período de tiempo, llamado "ventana inmunológica", entre la infección por VIH y la aparición de anticuerpos anti-VIH detectables. Durante este período, los anticuerpos por lo regular no se pueden medir.

De igual manera debemos tomar en cuenta que un resultado positivo en la prueba de detección ELISA no significa que la persona tenga la infección por VIH. Hay que tomar muy en cuenta que también hay ciertas afecciones que pueden llevar a que se presente un resultado falso positivo, como la enfermedad de Lyme, la sífilis y el lupus

 Referencias Bibliográficas:

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003538.htm

http://www.esmas.com/salud/enfermedades/infecciosas/334316.html

Clasificación del crecimiento de las bacterias según ...

Simmons Citrate Agar

Este medio de cultivo fue expuesto por los compañeros del equipo 4, y sus características son las siguientes:

• Se  usa para la diferenciación de las bacterias

• Su indicador de pH es el azul de Brootimol

• Su única fuente de energía es : Citrato de Permeasa

• Se usa en placa o en tubos inclinados

• pH= 6.9  +  0.2

Microorganismo	Citrato permeasa	Color del medio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603	Positivo	Azul
S. typhimurium ATCC 14028	Positivo	Azul
E. coli ATCC 25922	Negativo	Verde
S. flexneri ATCC 12022	Negativo	Verde

Limitaciones:

• Si se usa un inoculo denso puede variar el color del pico del verde al amarillo
• Inóculos densos (muy densos) pueden originar resultados falsos – positivos

Resultados

POSITIVO: Cambia de pH, si se muestra de color azul en el pico

NEGATIVO: Se  muestra de color verde, no hay desarrollo bacteriano ni cambio de color.